Пластичность трансплантированных мультипотентных нейральных клеток-предшественников: результаты исследований
Пластичность трансплантированных мультипотентных нейральных клеток-предшественников была подтверждена и в экспериментах на взрослых животных. Локальное микроокружение определяет направленность дифференцировки мультипотентных стволовых клеток.
Так, при трансплантации нейральных стволовых клеток в область прозрачной перегородки (septum) и диагональной полоски, где находятся преимущественно нейроны медиаторного фенотипа, формируются холинергические нейроны.
Исследован также синантогенез при трансплантации нервных стволовых клеток и клеток-предшественников. При введении клеток-предшественников в гиппокамп эмбрионов крыс формирование функциональных синаптических связей с новообразованными нейронами происходит в течение 1 месяца после трансплантации. Эти нейроны обладали спонтанной и вызванной синаптической активностью и реагировали на локальную ампликацию глутамата. Нервные стволовые клетки, полученные из стриатума и введенные в кору головного мозга, трансформируются в типичные корковые нейроны с характерными для них аксональными связями.
Изложенные выше результаты исследований указывают на ведущую роль местных факторов в фенотипической дифференциации трансплантированных нервные стволовые клетки и синаптической пластичности формирующихся аксонов.
Стресс. Различные типы стресса оказывали отрицательное влияние на нейрогенез в гиппокампе. В потомстве крыс, подвергшихся стрессорным воздействиям иммобилизацией с 15-20-го дня беременности до родов, обнаружено снижение пролиферативной активности и уменьшение количества нейронов в зубчатой фасции гиппокампа, что влекло за собой более низкую обучаемость 3-4-месячных крыс. Подобные результаты нарушения нейрогенеза были выявлены при стрессе у новорожденных крыс, подвергшихся однократному воздействию запаха чужого самца.
У крысят сразу же повышался уровень кортикостероидов в крови, а через 24 часа уменьшилось количество новообразованных клеток в зубчатой фасции гиппокампа. Социальный стресс вызывал нарушения деления нервных клеток в зубчатой извилине гиппокампа у взрослых обезьян. Это подтверждает пролиферативную чувствительность стволовых клеток в зрелом мозге приматов и подчеркивает высокую чувствительность этого процесса.
Одним из факторов патологии гиппокампа при стрессе является повышение продукции глюкокортикоидов, которые угнетают пролиферативную активность стволовых клеток-предшественников в субгранулярной зоне зубчатой фасции гиппокампа. Подтверждением этому служат результаты исследований, свидетельствующие о стимуляции нейрогенеза в данной структуре мозга после адреналэктомии.
Эпилепсия. При использовании модели пилокарпиновой эпилепсии у взрослых крыс показано, что судорожная активность вызывает интенсивную и длительную пролиферацию клеток-предшественников субгранулярной зоны зубчатой фасции гиппокампа. Для исключения возможной митотической активности пилокарпина была применена электростимуляция перфорантного пути — основной афферентной системы, связывающей энторинальную кору и гиппокамп.
Развивающиеся фокальные судороги не вызывали значительной гибели нейронов, но сопровождались выраженной активацией деления клеток в субгранулярной зоне и зоне клеток-зерен зубчатой фасции. При гистологических исследованиях установлена эктопическая локализация новообразованных нейронов, которые имели все признаки клеток-зерен зубчатой фасции. Эти клетки формировали атипичные синаптические связи.
Подобные патологические изменения в зубчатой фасции гиппокампа выявлены у больных с височной эпилепсией. Предполагается, что длительная судорожная активность, стимулирующая нейрогенез в гиппокампе и приводящая к его структурным и функциональным перестройкам, может быть фактором прогрессирующего развития эпилепсии. Возможно, генерация новых нейронов в зрелом мозге имеет негативные последствия, так как они формируют аберрантные синаптические связи.
При индукции судорожной активности у крыс электростимуляцией вентрального гиппокампа нейроны субгранулярной зоны и полиморфного слоя зубчатой фасции гиппокампа гибнут по механизму апоптоза. Одновременно активируется пролиферация клеток-предшественников нервных и глиальных клеток зубчатой фасции. Использование этой модели электрошоковой терапии у крыс позволило установить, что одиночные или повторные судороги стимулируют пролиферацию и ведут к формированию в зубчатой фасции гиппокампа новых нейронов, которые сохраняются до 3 месяцев.
Предполагается, что положительный клинический эффект шоковой терапии может быть связан с генерацией новых нейронов гиппокампа. Обоснованное в эксперименте угнетающее влияние возбуждающего нейромедиатора глутамата на нейрогенез противоречит данным о стимуляции размножения предшественников и образовании новых нейронов при судорожной активности в гиппокампе в экспериментальных новокаиновой и пилокарпиновой моделях эпилепсии. Такая противоречивость может быть объяснена значительной гибелью нейронов в гиппокампе, в том числе и в зубчатой извилине в этих моделях эпилепсии.
Влияние судорожной активности на нейрогенез косвенно подтверждают результаты наблюдений на традиционной модели эпилепсии, вызванной многократным субпороговым раздражением определенной области мозга (киндлинг) и характеризующейся менее выраженной гибелью нейронов, чем в «нейротоксических» моделях. При этом нейрогенез интенсифицируется только в поздней фазе киндлинга, когда в гиппокампе отмечается повреждение и гибель нейронов.
Судорожная активность при эпилепсии не только стимулирует нейрогенез, но и вызывает аномальную локализацию новых зернистых нейронов, многие из которых находятся не только в зубчатой извилине, но и в хилусе. Эти новые нейроны имеют большое значение в развитии спраутинга моховидных волокон — их аксоны образуют практически отсутствующие в норме обратные коллатерали, формирующие синапсы с соседними клетками-зернами.
Гипоксия / ишемия. Спустя 1-2 недели после 10-минутной глобальной ишемии мозга у монгольских песчанок происходило 12-кратное увеличение клеточной пролиферации в зубчатой фасции гиппокампа. Новообразованные нейроны выявлялись через 26 дней после ишемии только в зубчатой фасции гиппокампа и существовали не менее 7 месяцев. На модели обратимого циркулярного фетоиидуцированного тромбоза вызывали фокальную ишемию коры головного мозга взрослых крыс. Новообразованные клетки обнаружены через 7 дней во II-IV слоях новой коры. Основная масса клеток имела метку BrdU, то есть были клетками глии, макрофагами и эндотелиоцитами, и 3-6 % Клеток метились BrdU и MAP 2, что свидетельствовало об их нейрональной природе.
Стимулирующее влияние ишемических повреждений мозга на пролиферацию клеток-предшественников в мозге взрослых животных подтверждалось в опытах In vitro на монослойных культурах коры головного мозга 14-дневных эмбрионов крыс, подвергшихся сублетальной гипоксии.